美國(guó)GRC公司：Glen Research Corp 創(chuàng)建于1987年，專(zhuān)注于為DNA和RNA寡核苷酸的化學(xué)合成，修飾，標(biāo)記和純化提供zui廣泛的亞磷酰胺和固體支持物，現(xiàn)已有近三十年的歷史，在低聚核苷酸及修飾、改性領(lǐng)域一直處于地位。

終點(diǎn)修飾符  MODIFIERS

Glen Research 5'-Modifiers設(shè)計(jì)用于DNA合成儀，以功能化靶寡核苷酸的5'末端。5'-氨基 - 改性劑可提供各種鏈長(zhǎng)，以*符合所需的應(yīng)用。

與MMT保護(hù)的氨基相比，DMS（O）MT保護(hù)的氨基更容易脫保護(hù)。硫氧基衍生物在寡核苷酸合成的條件下存活，并且可以用標(biāo)準(zhǔn)解封閉溶液裂解，或保持完整用于HPLC純化。同時(shí)，DMS（O）MT組與濾芯純化*兼容。當(dāng)進(jìn)行盒上的脫三苯甲基化時(shí)，DMS（O）MT ⁺，其比MMT ⁺更穩(wěn)定，不會(huì)重新連接到胺。我們現(xiàn)在使用這種新的基于三苯甲基的保護(hù)基團(tuán)提供5'-DMS（O）MT-氨基 - 修飾劑C6。 

5'-氨基 - 改性劑TEG，親水性三甘醇乙胺衍生物，長(zhǎng)度為12個(gè)原子，*可溶于水性介質(zhì)中。

縮寫(xiě)

CE =氰乙基
CNEt =氰乙基
CPG =受控孔徑玻璃
DMT = 4,4'-二甲氧基 三苯甲基
Fmoc =芴基甲氧基羰基
iPr =異丙基
lcaa =長(zhǎng)鏈烷基氨基
μm=微摩爾
MMT = 4-單甲氧基三苯甲基
nm =納摩爾
T =三苯甲基
TBDMS =叔丁基 - 二甲基甲硅烷基
TFA =三氟乙?；?/span>

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終點(diǎn)修飾語(yǔ)（第2部分）

我們zui新的5'-氨基改性劑，由新型鄰苯二甲酸二酰胺（PDA）保護(hù)基團(tuán)保護(hù)，是穩(wěn)定的固體。與作為粘性油的TFA保護(hù)的氨基改性劑相反，類(lèi)似的PDA保護(hù)的化合物是粒狀粉末。這些化合物的這一重要特性允許直接處理，儲(chǔ)存和等分，并導(dǎo)致穩(wěn)定性的顯著增加。 

用甲胺在氣相或水溶液或AMA中脫保護(hù)導(dǎo)致快速和*除去PDA保護(hù)基團(tuán)。然而，氫氧化銨不會(huì)使平衡反應(yīng)完成并且僅發(fā)生部分脫保護(hù) - 用氫氧化銨過(guò)夜脫保護(hù)將產(chǎn)生約80％活性胺。

我們提供三種PDA Amino-Modifiers：

· 5'-氨基 - 修飾劑C6-PDA

· 疏水性5'-氨基 - 修飾劑C12-PDA

· 親水性5'-氨基 - 修飾劑-TEG-PDA

知識(shí)產(chǎn)權(quán)

PDA氨基改性劑由Stefan Pitsch和ReseaChem GmbH（S.Berger）開(kāi)發(fā)，正在申請(qǐng)。

其他儀器類(lèi)型

所有次要堿基，RNA產(chǎn)物和改性劑都包裝在適用于ABI和其他儀器的隔膜小瓶中。如果您想要其他類(lèi)型的樣品瓶/色譜柱，請(qǐng)將以下內(nèi)容添加到目錄號(hào)的末尾。

終點(diǎn)修飾語(yǔ)（第3部分）

二硫化物硫醇改性劑可用于引入3'-或5'-硫醇鍵。Dithiol Serinol，由硫辛酸和我們的絲氨醇骨架生產(chǎn)，可以輕松連接多個(gè)二硫醇標(biāo)記的寡核苷酸到金表面。5'-羧基 - 修飾劑C10是設(shè)計(jì)為在寡核苷酸合成的末端添加的*接頭。它產(chǎn)生活化的羧酸N-羥基琥珀酰亞胺（NHS）酯，其適合于在含有伯胺的分子的合成柱上立即綴合，產(chǎn)生穩(wěn)定的酰胺鍵。另一種羧酸鹽保護(hù)基團(tuán)是2-氯三苯甲基基團(tuán)，其使用標(biāo)準(zhǔn)去封閉循環(huán)簡(jiǎn)單地除去，以在另外*保護(hù)的寡核苷酸上產(chǎn)生游離羧基。2-氯三苯甲基基團(tuán)在用氫氧化銨或AMA進(jìn)行低聚脫保護(hù)期間也被除去，并且與RP純化技術(shù)不相容。PC Amino-Modifier是一種光可裂解的C6氨基改性劑，是我們的光可裂解（PC）改性劑系列的一部分。5'-氨基氧基 - 修飾劑11基于四乙二醇鍵，用于改善溶解度和減少對(duì)寡核苷酸雜交的潛在負(fù)面影響。由烷氧基胺與醛反應(yīng)形成的肟形成穩(wěn)定的共價(jià)鍵。相比之下，通過(guò)伯胺與醛的共軛形成的亞胺對(duì)酸性或堿性條件不穩(wěn)定，并且需要隨后用硼氫化物還原以形成穩(wěn)定的胺綴合物。5'-馬來(lái)酰亞胺改性劑亞磷酰胺，由巴塞羅那大學(xué)開(kāi)發(fā)，含有馬來(lái)酰亞胺環(huán)加成物，在室溫下對(duì)氫氧化銨穩(wěn)定。該亞磷酰胺可以與磷酸酯和硫代磷酸酯鍵結(jié)合到DNA和RNA中。retro-Diels-Alder反應(yīng)在綴合之前立即使馬來(lái)酰亞胺脫保護(hù)。

知識(shí)產(chǎn)權(quán)

5'-Carboxy-Modifier C10經(jīng)TriLink BioTechnologies，Inc。許可銷(xiāo)售。它僅用于研究和開(kāi)發(fā)目的，不得用于商業(yè)，臨床，診斷或任何其他用途。它包含在美國(guó)No.6,320,041中。

5'-馬來(lái)酰亞胺改性劑亞磷酰胺受申請(qǐng)保護(hù)，由Glen Research根據(jù)巴塞羅那大學(xué)的許可協(xié)議提供。

Glen Research與AmberGen，Inc。和Link Technologies，Ltd。聯(lián)合提供PC Biotin，PC Amino-Modifier和PC Spacer產(chǎn)品。Serinol產(chǎn)品由美國(guó)號(hào)8,394,948涵蓋。

其他儀器類(lèi)型

所有次要堿基，RNA產(chǎn)物和改性劑都包裝在適用于ABI和其他儀器的隔膜小瓶中。如果您想要其他類(lèi)型的樣品瓶/色譜柱，請(qǐng)將以下內(nèi)容添加到目錄號(hào)的末尾。

序列修飾符

序列修飾符設(shè)計(jì)用于自動(dòng)合成。羧基-dT在脫保護(hù)過(guò)程中水解，并且可以通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)肽偶聯(lián)或通過(guò)中間體N-羥基琥珀酰亞胺（NHS）酯直接與含有伯氨基的分子偶聯(lián)。在寡核苷酸合成期間，可分別加入氨基 - 修飾劑dA，氨基 - 修飾劑dC，N2-氨基 - 修飾劑dG和兩種氨基 - 修飾劑dT產(chǎn)物代替dA，dC，dG和dT殘基。相應(yīng)的氨基 - 修飾物支持物可以取代它們各自的脫氧核苷支持物。脫保護(hù)后，C6類(lèi)似物上的伯胺通過(guò)具有總共7-10個(gè)原子的間隔臂與寡核苷酸分離，并且可以標(biāo)記或附著于酶。

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序列修飾符（第2部分）

我們的NHS酯衍生物庫(kù)已經(jīng)擴(kuò)展到包括NHS-羧基-dT-CE亞磷酰胺。通過(guò)制備羧基 - 修飾物C10的dT類(lèi)似物，可以標(biāo)記寡核苷酸內(nèi)的一個(gè)或多個(gè)位點(diǎn)。當(dāng)亞磷酰胺不可用時(shí)，這開(kāi)辟了在寡核苷酸內(nèi)標(biāo)記任何數(shù)量的不同染料或分子的可能性。這樣做很簡(jiǎn)單，可以在合成器上手動(dòng)完成，甚至可以在DNA合成器上以全自動(dòng)方式完成。

我們從未發(fā)現(xiàn)允許TFA組從氨基修飾劑中除去而寡核苷酸保持與支持物連接的條件。我們能夠通過(guò)使用9-芴基甲氧基羰基（Fmoc）保護(hù)基來(lái)解決這個(gè)問(wèn)題。使用兩步法除去Fmoc基團(tuán)，步除去氰乙基保護(hù)基團(tuán)，用乙腈中的1％二異丙胺從合成柱中沖洗形成的丙烯腈，第二步用10％哌啶的DMF溶液除去Fmoc基團(tuán)。在柱上形成的氨基可以與各種活化酯反應(yīng)。我們提供Fmoc-氨基修飾劑C6 dT亞磷酰胺作為核苷選擇，氨基修飾劑Serinol亞磷酰胺作為非核苷替代物。我們還提供S-Bz-Thiol-Modifier C6-dT，以加入用于寡核苷酸合成的硫醇修飾劑等級(jí)。硫醇 - 改性劑C6-dT可以照常添加到序列內(nèi)的所需位置。

知識(shí)產(chǎn)權(quán)

Serinol產(chǎn)品由美國(guó)號(hào)8,394,948涵蓋。

其他儀器類(lèi)型

所有次要堿基，RNA產(chǎn)物和改性劑都包裝在適用于ABI和其他儀器的隔膜小瓶中。如果您想要其他類(lèi)型的樣品瓶/色譜柱，請(qǐng)將以下內(nèi)容添加到目錄號(hào)的末尾。

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3'-修飾符

含有用堿不穩(wěn)定Fmoc基團(tuán)保護(hù)的氨基的3'-氨基 - 修飾物CPG被設(shè)計(jì)成通過(guò)引入伯胺來(lái)官能化靶寡核苷酸的3'末端。在另一種方法中，注定成為3'-氨基的氮包括在鄰苯二甲酰亞胺（PT）基團(tuán)中，該基團(tuán)通過(guò)與芳環(huán)連接的酰胺基團(tuán)與載體連接。這種簡(jiǎn)單的連接對(duì)于寡核苷酸合成的所有條件都是非常穩(wěn)定的，并且不含手性中心。使用延長(zhǎng)的氫氧化銨處理（55℃，17小時(shí)），從鄰苯二甲酰亞胺中裂解胺，同時(shí)脫保護(hù)寡核苷酸。除非另有要求，否則提供ABI型柱。

知識(shí)產(chǎn)權(quán)

Serinol產(chǎn)品由美國(guó)號(hào)8,394,948涵蓋。

3'-修飾語(yǔ)（第2部分）

3'-硫醇 - 修飾劑SS CPG載體用于將具有3和6個(gè)原子間隔區(qū)的3'-硫醇鍵引入寡核苷酸中。3'-二硫醇絲氨醇CPG用于在3'末端引入二硫醇基團(tuán)。與Dithiol Serinol亞磷酰胺一起，很容易在3'末端產(chǎn)生具有多個(gè)硫醇基團(tuán)的寡核苷酸，這是與金表面結(jié)合的理想選擇。對(duì)于甘油CPG，寡核苷酸的3'末端易被高碘酸鈉氧化形成3'-磷酸甘油醛。醛可以進(jìn)一步氧化成相應(yīng)的羧酸。醛或羧酸鹽可以用于隨后與含胺產(chǎn)物的綴合。

知識(shí)產(chǎn)權(quán)

3'-硫醇 - 改性劑6 SS CPG由Berry＆Associates公司開(kāi)發(fā)，并在Berry＆Associates的協(xié)議下銷(xiāo)售。

Serinol產(chǎn)品由美國(guó)號(hào)8,394,948涵蓋。

其他儀器類(lèi)型

所有次要堿基，RNA產(chǎn)物和改性劑都包裝在適用于ABI和其他儀器的隔膜小瓶中。如果您想要其他類(lèi)型的樣品瓶/色譜柱，請(qǐng)將以下內(nèi)容添加到目錄號(hào)的末尾。

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3'-修飾語(yǔ)（第3部分）

3'-氨基 - 修飾劑C6dC CPG和3'-氨基 - 修飾劑C6dT CPG分別在3'末端取代dC和T. 這些產(chǎn)品可以方便地在3'標(biāo)記，而不會(huì)阻止末端產(chǎn)生所需的酶活性。

化學(xué)磷酸化

化學(xué)磷酸化試劑常用于磷酸化寡核苷酸的5'-末端。盡管該產(chǎn)物在3'-磷酸化中也是成功的，但3'-磷酸CPG允許直接制備具有3'-磷酸基團(tuán)的寡核苷酸?；瘜W(xué)磷酸化試劑II在側(cè)鏈上含有DMT基團(tuán)，其對(duì)堿基切割是穩(wěn)定的并且可以留在寡核苷酸上用于RP純化。隨后用酸水溶液除去DMT組，用氫氧化銨水溶液短暫處理后除去側(cè)鏈，得到5'-磷酸鹽.1固體CPR II的性能與CPR II相似，但更容易制備等分試樣，因?yàn)樗欠勰?。許多研究人員用受阻堿（例如二乙胺，二異丙基乙胺，或DBU）后合成以消除和除去氰乙基磷酸酯基團(tuán)。以這種方式，原位形成的丙烯腈從載體上除去，并且不能使寡聚物中N3位的dT殘基烷基化。由于3'-磷酸CPG中的磺基乙基也易于β-消除，導(dǎo)致寡核苷酸裂解，因此該技術(shù)與3'-磷酸CPG不相容。使用基礎(chǔ)不穩(wěn)定但不支持β-消除的CPR II CPG，可以在切割和堿基去保護(hù)之前從寡核苷酸中除去氰乙基。除非另有要求，否則提供ABI型樣品瓶和色譜柱。原位形成的丙烯腈從載體上除去，不能使寡核苷酸中N3位的dT殘基烷基化。由于3'-磷酸CPG中的磺基乙基也易于β-消除，導(dǎo)致寡核苷酸裂解，因此該技術(shù)與3'-磷酸CPG不相容。使用基礎(chǔ)不穩(wěn)定但不支持β-消除的CPR II CPG，可以在切割和堿基去保護(hù)之前從寡核苷酸中除去氰乙基。除非另有要求，否則提供ABI型樣品瓶和色譜柱。原位形成的丙烯腈從載體上除去，不能使寡核苷酸中N3位的dT殘基烷基化。由于3'-磷酸CPG中的磺基乙基也易于β-消除，導(dǎo)致寡核苷酸裂解，因此該技術(shù)與3'-磷酸CPG不相容。使用基礎(chǔ)不穩(wěn)定但不支持β-消除的CPR II CPG，可以在切割和堿基去保護(hù)之前從寡核苷酸中除去氰乙基。除非另有要求，否則提供ABI型樣品瓶和色譜柱。在裂解和堿去保護(hù)之前，可以從寡聚物中除去氰乙基。除非另有要求，否則提供ABI型樣品瓶和色譜柱。在裂解和堿去保護(hù)之前，可以從寡聚物中除去氰乙基。除非另有要求，否則提供ABI型樣品瓶和色譜柱。

知識(shí)產(chǎn)權(quán)

固體化學(xué)磷酸化試劑II和相關(guān)載體包括在歐洲EP0816368中。

參考（S）

1. A. Guzaev，A.Azhayev和H. Lonnberg，Tetrahedron，1995,51,9375-9384。

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醛改性

醛改性劑在寡核苷酸中是有吸引力的親電子取代，因?yàn)樗鼈兡軌蚺c氨基反應(yīng)形成席夫堿，肼基形成腙，并與氨基脲形成半咔唑酮。席夫堿是不穩(wěn)定的，必須用硼氫化鈉還原以形成穩(wěn)定的連接，但腙和氨基脲是非常穩(wěn)定的鍵。

我們與以前的Epoch Biosciences的ELITechGroup合作，使我們能夠提供5'-醛改性劑C2亞磷酰胺。縮醛保護(hù)基團(tuán)具有足夠的疏水性，可用于RP HPLC和柱純化，并且在標(biāo)準(zhǔn)寡核苷酸脫三苯甲基化條件下用80％乙酸/ 20％水或2％三氟yi酸水溶液在寡核苷酸合成過(guò)程中容易除去。

甲酰基吲哚核苷類(lèi)似物已用于在寡核苷酸內(nèi)或5'末端引入醛基。該產(chǎn)物在醛上沒(méi)有保護(hù)基團(tuán)，這意味著可以在不改變優(yōu)選條件的情況下進(jìn)行修飾寡核苷酸的去保護(hù)。

知識(shí)產(chǎn)權(quán)

本產(chǎn)品僅用于研究目的，不得用于商業(yè)，臨床，診斷或任何其他用途。本產(chǎn)品受ELITechGroup的所有權(quán)所有，并由ELITechGroup許可制造和銷(xiāo)售。對(duì)于這些產(chǎn)品，沒(méi)有商業(yè)用途的隱含許可，并且必須直接從ELITechGroup獲得有關(guān)這些產(chǎn)品的任何擬議商業(yè)用途的許可。“商業(yè)用途”包括但不限于產(chǎn)品的銷(xiāo)售，租賃，許可或其他轉(zhuǎn)讓或從中衍生或生產(chǎn)的任何材料，銷(xiāo)售，租賃，許可或其他授權(quán)使用產(chǎn)品或任何衍生材料或由其生產(chǎn)，或使用本產(chǎn)品為第三方收取服務(wù)（包括合同研究）。

在終用戶(hù)和定制寡核苷酸服務(wù)可以購(gòu)買(mǎi)這些產(chǎn)品以供上述定義使用之前，必須簽署一份簡(jiǎn)單的協(xié)議。

間隔修飾符

間隔子亞磷酰胺C3,9，C12和18用于在寡核苷酸中插入間隔臂。當(dāng)需要較長(zhǎng)的間隔物時(shí)，可以多次添加化合物。3'-間隔區(qū)C3 CPG還可以在3'末端充當(dāng)外切核酸酶和聚合酶活性的阻斷劑。dSpacer用于在寡核苷酸內(nèi)引入穩(wěn)定的無(wú)堿基位點(diǎn)。PC Spacer是一種可光裂解的C3間隔物改性劑，是我們的光可裂解（PC）改性劑系列的一部分。

知識(shí)產(chǎn)權(quán)

Glen Research與AmberGen，Inc。和Link Technologies，Ltd。聯(lián)合提供PC Biotin，PC Amino-Modifier和PC Spacer產(chǎn)品。

所有次要堿基，RNA產(chǎn)物和改性劑都包裝在適用于ABI和其他儀器的隔膜小瓶中。如果您想要其他類(lèi)型的樣品瓶/色譜柱，請(qǐng)將以下內(nèi)容添加到目錄號(hào)的末尾。

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樹(shù)狀大分子

樹(shù)枝狀聚合物是離散的，高度支化的，單分散的聚合物，其具有令人聯(lián)想到樹(shù)木分枝的圖案。可以使用新型雙倍和三倍體亞磷酰胺合成子合成平原和混合寡核苷酸樹(shù)枝狀大分子。^1,2 樹(shù)枝狀大分子具有以下優(yōu)點(diǎn)。使用g- ³²摻入標(biāo)記P-ATP和多核苷酸激酶與5'-末端的數(shù)量成比例地增加。如果在標(biāo)簽和分支的末端之間加入間隔物，則熒光信號(hào)也與5'末端的數(shù)量成比例地增加。當(dāng)使用樹(shù)枝狀聚合物寡核苷酸作為PCR引物時(shí)，帶有樹(shù)枝狀聚合物的鏈對(duì)T7基因6外切核酸酶的降解具有抗性，使得易于將PCR的雙鏈產(chǎn)物轉(zhuǎn)化為多重標(biāo)記的單鏈探針。DNA樹(shù)枝狀聚合物的穩(wěn)定性增強(qiáng)使它們可用作納米組裝“自下而上”方法的構(gòu)建模塊。當(dāng)需要更高的溫度時(shí)，這些特征還表明在DNA芯片技術(shù)中的應(yīng)用，例如，熔化靶中的二級(jí)結(jié)構(gòu)。

知識(shí)產(chǎn)權(quán)

這些產(chǎn)品由牛津大學(xué)創(chuàng)新有限公司許可提供。

參考（S）

1. MS Shchepinov，IA Udalova，AJ Bridgman和EM Southern，Nucleic Acids Res，1997,25,4447-4454。

2. MS Shchepinov，KU Mir，JK Elder，MD Frank-Kamenetskii和EM Southern，Nucleic Acids Res，1999,27,3035-41。

其他儀器類(lèi)型

所有次要堿基，RNA產(chǎn)物和改性劑都包裝在適用于ABI和其他儀器的隔膜小瓶中。如果您想要其他類(lèi)型的樣品瓶/色譜柱，請(qǐng)將以下內(nèi)容添加到目錄號(hào)的末尾。

支鏈亞磷酰胺

需要支化單體來(lái)構(gòu)建梳狀寡核苷酸探針。來(lái)自Chiron公司的梳子系統(tǒng)的評(píng)估了^1個(gè)分支點(diǎn)的保護(hù)基團(tuán)并選擇了乙酰丙酰基（LEV），其使用含有水合肼，乙酸和吡啶的試劑特異性地除去。

參考（S）

1. T. Horn，CA Chang和MS Urdea，Nucleic Acids Res，1997,25,4842-4849。

光可裂解改性劑

PC生物素亞磷酰胺可用于制備5'-生物素化的寡核苷酸，其適合于通過(guò)鏈霉抗生物素蛋白以類(lèi)似于我們流行的5'生物素亞磷酰胺的方式捕獲。已證明氨基和硫醇修飾的寡核苷酸非常適用于各種半抗原和熒光團(tuán)的連接，以及寡核苷酸與多種珠子和表面的連接。PC氨基 - 修飾劑亞磷酰胺用于制備適于隨后光切割的5'-氨基修飾的寡核苷酸。PC Spacer亞磷酰胺可用作中間體，將任何可用作亞磷酰胺的修飾試劑連接到寡核苷酸的末端。光切割后，DNA上產(chǎn)生5'-磷酸，使其適合進(jìn)一步的生物轉(zhuǎn)化，

密蘇里州華盛頓大學(xué)的研究人員描述了一種多功能光可裂解DNA構(gòu)建模塊，并用于光觸發(fā)雜交。¹ 該試劑還用于設(shè)計(jì)多功能DNA和RNA結(jié)合物^2，用于體外選擇催化生物分子反應(yīng)的新分子。德國(guó)Bruker Daltonik的研究人員還開(kāi)發(fā)了genoSNIP，這是一種通過(guò)MALDI-TOF質(zhì)譜進(jìn)行單核苷酸多態(tài)性（SNP）基因分型的方法。³該方法通過(guò)摻入光可切割接頭使用引物延伸產(chǎn)物的尺寸減小，用于在延伸引物的3'末端附近的光觸發(fā)鏈斷裂。PC Linker可通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)自動(dòng)DNA合成方法在任何位置摻入寡核苷酸中。PC連接子亞磷酰胺具有額外的優(yōu)點(diǎn)，即光切割在寡核苷酸片段的3'和5'末端都產(chǎn)生單磷酸酯片段。

知識(shí)產(chǎn)權(quán)

Glen Research與AmberGen，Inc。和Link Technologies，Ltd。聯(lián)合提供PC Biotin，PC Amino-Modifier和PC Spacer產(chǎn)品。

參考（S）

1. P. Ordoukhanian和JS。泰勒，J。Am?；瘜W(xué)。Soc。，117,9570-9571,1995。

2. （a）F。Hausch和A.Jäschke，Nucleic Acids Research，2000,28，e35。

3. （b）F。Hausch和A.Jäschke，Tetrahedron，2001,57,1261-1268。

4. T. Wenzel，T.Elssner，K.Fahr，J.Bimmler，S.Richter，I.Thomas，和M.Kostrzewa，Nucleosides，Nucleotides＆Nucleic Acids，2003,22,1579-1581。

其他儀器類(lèi)型

所有次要堿基，RNA產(chǎn)物和改性劑都包裝在適用于ABI和其他儀器的隔膜小瓶中。如果您想要其他類(lèi)型的樣品瓶/色譜柱，請(qǐng)將以下內(nèi)容添加到目錄號(hào)的末尾。

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使用CLICK CHEMISTRY進(jìn)行共軛

銅（I）的疊氮化物和炔烴，以形成1,2,3-三唑之間催化的疊氮化物-炔環(huán)加成加成（CuAAC）反應(yīng)，據(jù)報(bào)道¹由夏普勒斯，被發(fā)現(xiàn)是如此精致的區(qū)域選擇性和率在即使是溫和的條件Sharpless創(chuàng)造了“點(diǎn)擊化學(xué)”一詞來(lái)形容它。由于銅離子損害DNA，通常產(chǎn)生鏈斷裂，因此這種方法用于DNA修飾的用途有所延遲。²現(xiàn)在通過(guò)使用銅（I） - 穩(wěn)定配體（例如，三（芐基三唑基甲基）胺，TBTA ³）克服了這些問(wèn)題，Carell等人。和Seela等人。發(fā)現(xiàn)CuAAC反應(yīng)可用于以*的效率使炔烴修飾的DNA核堿基官能化。⁴ 

帶有單個(gè)核苷炔基的寡核苷酸可以使用C8-炔烴-dC或dT-CE亞磷酰胺制備。純化的寡核苷酸通常用2-5當(dāng)量的相應(yīng)標(biāo)記物 - 疊氮化物（例如熒光染料疊氮化物）修飾。在加入預(yù)絡(luò)合的Cu（I）后，在30分鐘至4小時(shí)的時(shí)間跨度內(nèi)觀察到*轉(zhuǎn)化為標(biāo)記的寡聚物。在簡(jiǎn)單的沉淀步驟后，可以接近定量的產(chǎn)率回收標(biāo)記的寡核苷酸。使用C8-炔烴，C8-TIPS-炔烴和C8-TMS-炔烴的組合，可以在多三次單獨(dú)的點(diǎn)擊反應(yīng)中標(biāo)記寡核苷酸。后兩種單體上的炔基分別用三異丙基甲硅烷基（TIPS）和san甲基甲硅烷基（TMS）保護(hù)基團(tuán)保護(hù)。^5,6 在C8-炔烴上的固相上的次點(diǎn)擊反應(yīng)產(chǎn)生單一修飾的寡核苷酸，其*保留TIPS和/或TMS保護(hù)基團(tuán)。對(duì)于雙擊，使用C8-TIPS-炔烴作為第二核苷，并且用氟化四丁基銨（TBAF）裂解TIPS保護(hù)基團(tuán)而不對(duì)DNA造成任何損害。溶液中的第二次點(diǎn)擊反應(yīng)以*的產(chǎn)率產(chǎn)生雙重修飾的寡核苷酸。為了引入三種不同的標(biāo)記，將所有三種核苷引入寡核苷酸中。次點(diǎn)擊反應(yīng)直接在樹(shù)脂上進(jìn)行。隨后將單獨(dú)修飾的寡核苷酸從載體上切下，同時(shí)切割TMS基團(tuán)并保留TIPS保護(hù)基團(tuán)。第二次點(diǎn)擊反應(yīng)在溶液中進(jìn)行。

知識(shí)產(chǎn)權(quán)

baseclick的所有產(chǎn)品均受保護(hù)，可與baseclick合作。

Baseclick GmbH已提交以下申請(qǐng)：

1.WO2006 / 117161，用于敏感檢測(cè)分析物的新標(biāo)記策略。

2.WO2008 / 952775，Click Chemistry用于產(chǎn)生報(bào)告分子。

Baseclick GmbH擁有“The Scripps Research Institute”的“Click Chemistry”研究市場(chǎng)的許可證：

3. WO03 / 101972，疊氮化物和乙炔的銅催化連接。

其他儀器類(lèi)型

所有次要堿基，RNA產(chǎn)物和改性劑都包裝在適用于ABI和其他儀器的隔膜小瓶中。如果您想要其他類(lèi)型的樣品瓶/色譜柱，請(qǐng)將以下內(nèi)容添加到目錄號(hào)的末尾。

使用CLICK CHEMISTRY進(jìn)行共軛（第2部分）

5-乙炔基-dU提供與疊氮化物的方便的點(diǎn)擊綴合，以產(chǎn)生與寡核苷酸堿基之一剛性連接的標(biāo)記。5-乙炔基-dU在裂解和去保護(hù)過(guò)程中經(jīng)歷堿催化水合，特別是當(dāng)使用強(qiáng)堿或加熱時(shí)。乙炔基的水合形成甲基酮，其隨后阻止?jié)撛诘狞c(diǎn)擊反應(yīng)。當(dāng)使用5-乙炔基-dU-CE亞磷酰胺以防止該副反應(yīng)時(shí)，需要溫和的脫保護(hù)條件。TIPS-5-Ethynyl-dU-CE亞磷酰胺含有受保護(hù)的炔烴，與寡核苷酸合成和脫保護(hù)具有更廣泛的相容性。用三異丙基甲硅烷基（TIPS）保護(hù)基保護(hù)5-乙炔基可防止寡核苷酸合成和后處理過(guò)程中酸或堿催化的水合作用。

知識(shí)產(chǎn)權(quán)

除其他申請(qǐng)（4-5）外，baseclick GmbH還獲得了以下（1-3）。

1.WO 2006/117161（用于敏感檢測(cè)分析物的新標(biāo)記策略）

2.WO 2008/952775（點(diǎn)擊化學(xué)用于產(chǎn)生報(bào)告分子）

3.WO 2010/115957（非均相催化劑上的化學(xué)）

4. PCT / EP2013 / 064610（Anandamide修飾的核酸分子）

5. PCT / EP 2015/056007（DNA折紙的自組裝：診斷工具）

baseclick GmbH擁有du家授權(quán)申請(qǐng)

WO 03/101972（用于核酸領(lǐng)域的銅催化的疊氮化物和乙炔的連接）在診斷和研究領(lǐng)域。由于Glen Research和baseclick是合作伙伴，Glen Research現(xiàn)在能夠幫助對(duì)這項(xiàng)杰出技術(shù)進(jìn)行再許可。

參考（S）

1. CW Tornoe，C。Christensen，M。Meldal，J。Org。化學(xué)。2002,67,3057-3064; VV Rostovtsev，LG Green，VV Fokin，KB Sharpless，Angew?；瘜W(xué)。2002,114,2708-2711; Angew。化學(xué)。詮釋。埃德。2002,41,2596-2599。

2. CJ Burrows，JG Muller，Chem。Rev.1998,98,1109-1151。

3. TR Chan，R。Hilgraf，KB Sharpless，VV Fokin，Org?？靾?bào)。2004年，6,2853 - 2855。

4. J. Gierlich，GA Burley，PME Gramlich，DM Hammond，T。Carell，Org?？靾?bào)。2006,8,3639-3642。F. Seela，VR Sirivolu，Chem。生物多樣性2006,3,509-514。

5. PME Gramlich，S。Warncke，J。Gierlich，T。Carell，Angew?；瘜W(xué)。2008,120,3491-3493; Angew。化學(xué)。詮釋。埃德。2008,47,3442-3444。

6. PME Gramlich，CT Wirges，A。Manetto，T。Carell，Angew。化學(xué)。詮釋。埃德。2008,47,8350-8358。

使用CLICK CHEMISTRY進(jìn)行共軛（第3部分）

使用5'-己烯基亞磷酰胺制備的寡核苷酸對(duì)標(biāo)準(zhǔn)脫保護(hù)條件是穩(wěn)定的，并且在RP HPLC上顯示略微增加的保留時(shí)間。疊氮化物與使用亞磷酰胺的寡核苷酸合成不相容，因此需要后合成反應(yīng)。疊氮基丁酸酯NHS酯使用¹在任一3'-末端或低聚的5'-末端胺的疊氮基修飾和它甚至可以用于在序列內(nèi)的氨基-修飾-C6 DX殘余內(nèi)部修飾。具體到5'-末端，在后一個(gè)循環(huán)中加入5'-溴己基亞磷酰胺。然后通過(guò)使用疊氮化na置換溴化物，可以容易地將該改性劑轉(zhuǎn)化為5'-疊氮基。²炔烴NHS酯允許多種分子中的氨基部分的官能化，包括DNA和RNA寡核苷酸以及肽或蛋白質(zhì)。我們還提供兩種用于Click化學(xué)的產(chǎn)品，基于我們的1,3-二醇產(chǎn)品組合，其中含有絲氨醇骨架 - 用于在5'末端或序列內(nèi)添加炔基的亞磷酰胺，以及用于標(biāo)記3的化合物支持。 '具有炔基的寡核苷酸的末端。 

知識(shí)產(chǎn)權(quán)

Serinol產(chǎn)品由美國(guó)號(hào)8,394,948涵蓋。

參考（S）

1. R. Kumar等，Journal of the American Chemical Society，2007,129,6859-6864。

2. J. Lietard，A。Meyer，JJ Vasseur和F. Morvan，Tetrahedron Letters，2007,48,8795-8798。

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使用CLICK CHEMISTRY進(jìn)行共軛（第4部分）

1-乙炔基-dSpacer CE亞磷酰胺可用于寡核苷酸內(nèi)的任何位置，同時(shí)仍保持的點(diǎn)擊化學(xué)。使用標(biāo)準(zhǔn)亞磷酰胺化學(xué)將改性劑有效地?fù)饺牍押塑账嶂?，?duì)常見(jiàn)的脫保護(hù)條件是穩(wěn)定的，并且與Glen-Pak TM純化相容。1-炔基-dSpacer在與疊氮化物點(diǎn)擊化學(xué)結(jié)合后產(chǎn)生取代的1,2,3-三唑假核堿基1-乙炔基-dSpacer修飾物表現(xiàn)出與標(biāo)準(zhǔn)dSpacer（10-1914）相似的雙鏈體穩(wěn)定性并且當(dāng)雙鏈體不穩(wěn)定時(shí)內(nèi)部合并。在環(huán)加成后，通過(guò)所得的修飾結(jié)構(gòu)來(lái)調(diào)節(jié)雙鏈體穩(wěn)定性。簡(jiǎn)單的1,2,3-三唑是不穩(wěn)定的，結(jié)合TEG接頭（6-FAM-TEG和Amino-TEG）的修飾也是如此。摻入芳族官能團(tuán)的修飾使香豆素和補(bǔ)骨脂素在不同程度上恢復(fù)雙鏈穩(wěn)定性，顯著恢復(fù)穩(wěn)定性。

5'-碘修飾的寡核苷酸（使用5'-Iodo-dT制備）可以定量轉(zhuǎn)化為相應(yīng)的5'-疊氮化物

穩(wěn)定性說(shuō)明

除了在室溫下在氫氧化銨中進(jìn)行脫保護(hù)24小時(shí)之外，常規(guī)制備含有5'-碘基的寡核苷酸。在這些條件下，碘基的降解小于2％。

其他儀器類(lèi)型

所有次要堿基，RNA產(chǎn)物和改性劑都包裝在適用于ABI和其他儀器的隔膜小瓶中。如果您想要其他類(lèi)型的樣品瓶/色譜柱，請(qǐng)將以下內(nèi)容添加到目錄號(hào)的末尾。

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OLIGO-CLICK KITS

Oligo-Click Kits在預(yù)裝和即用型小瓶中含有顆粒形式的空氣穩(wěn)定的不溶性Cu（I）源。在試劑盒中，TBTA配體被活化劑取代，活化劑與水溶劑和有機(jī)溶劑相容。催化劑和配體/活化劑的這種創(chuàng)新組合使得標(biāo)簽工作流程更加簡(jiǎn)單，只需三個(gè)簡(jiǎn)單的步驟。通過(guò)CuAAC標(biāo)記寡核苷酸的制備現(xiàn)在僅需要幾分鐘或甚至更少的小手動(dòng)操作時(shí)間，并且可以在空氣中進(jìn)行而無(wú)需任何額外的預(yù)防措施。Glen Research與baseclick GmbH合作提供以下套件。 

· Oligo-Kit M Reload：該試劑盒具有足夠的試劑，可在100 nmole級(jí)別上偶聯(lián)多達(dá)9種含有炔烴的寡核苷酸，或在1μmole級(jí)別上偶聯(lián)單個(gè)寡核苷酸。使用者必須提供疊氮化物和溶劑如DMSO以溶解疊氮化物。

· Oligo-Kit M Biotin，Oligo-Kit M熒光素和Oligo-Kit M TAMRA：每個(gè)試劑盒都有足夠的試劑，可以在100 nmole級(jí)別上偶聯(lián)7種含炔烴的寡核苷酸或1μmole級(jí)別的單一寡核苷酸。每個(gè)試劑盒都含有所有必需的成分，包括疊氮化物和DMSO溶劑。

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無(wú)銅點(diǎn)擊化學(xué)

在Glen Research，我們的目標(biāo)是提供具有以下特性的無(wú)銅點(diǎn)擊亞磷酰胺試劑：

· 簡(jiǎn)單易用

· 在合成器上穩(wěn)定解決方案

· 對(duì)氫氧化銨和AMA穩(wěn)定

· 在室溫下17小時(shí)或更短時(shí)間內(nèi)具有出色的咔嗒性能

從迄今描述的各種基于環(huán)辛炔的無(wú)銅點(diǎn)擊試劑，我們選擇提供基于二苯并環(huán)辛炔（DBCO）結(jié)構(gòu)的化合物。我們提供5'-DBCO-TEG亞磷酰胺用于制備具有5'-DBCO修飾的寡核苷酸和DBCO-dT-CE亞磷酰胺用于在寡核苷酸內(nèi)的任何位置插入DBCO基團(tuán)。此外，我們還提供DBCO亞磷酰胺 - DBCO-絲氨醇亞磷酰胺。使用我們專(zhuān)有的serinol骨架作為非核苷間隔物，可以將DBCO組放置在序列中的任何位置，并且可以清楚地進(jìn)行多次添加。DBCO-磺基-NHS酯也用于合成后的綴合反應(yīng)。DBCO-修飾的寡核苷酸可以在有機(jī)溶劑（例如DMSO）或水性緩沖液中與疊氮化物綴合。取決于使用的疊氮化物，反應(yīng)將在室溫下在4-17小時(shí)內(nèi)完成。Glen Gel-Pak™上的簡(jiǎn)單脫鹽使得產(chǎn)品具有幾乎定量的結(jié)合效率。

注意：我們現(xiàn)在建議使用0.5M CSO的無(wú)水乙腈（40-4632-xx）完成含有DBCO-dT的寡核苷酸的合成。如果DBCO-dT經(jīng)歷不超過(guò)8-10次循環(huán)，則可以通過(guò)碘氧化實(shí)現(xiàn)可接受的結(jié)果。

其他儀器類(lèi)型

所有次要堿基，RNA產(chǎn)物和改性劑都包裝在適用于ABI和其他儀器的隔膜小瓶中。如果您想要其他類(lèi)型的樣品瓶/色譜柱，請(qǐng)將以下內(nèi)容添加到目錄號(hào)的末尾。

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使用點(diǎn)擊化學(xué)的共軛（第6部分）

Glen Research首先提供我們zui受歡迎的標(biāo)簽，然后我們將添加與亞磷酰胺化學(xué)不相容的疊氮化物產(chǎn)品。 

生物素仍然是我們常用的標(biāo)簽和生物素，其親水性三甘醇間隔物是zui受歡迎的生物素產(chǎn)品。Desthiobiotin是一種生物素類(lèi)似物，很好地被鏈霉抗生物素蛋白捕獲，但通過(guò)將生物素溶液應(yīng)用于鏈霉抗生物素蛋白珠，可以很容易地釋放捕獲的產(chǎn)物。6-FAM是我們zui受歡迎的熒光素衍生物，我們提供6-FAM和新戊酰保護(hù)的6-FAM的疊氮化物，用于后續(xù)反應(yīng)需要保護(hù)6-FAM的情況。在兩種6-FAM產(chǎn)品中，再次使用親水性TEG間隔物。疊氮化物以25和100μmole包裝提供，以方便寡核苷酸標(biāo)記。

7-Hydroxycoumarin，也稱(chēng)為傘形酮，是一種高熒光，pH敏感的熒光團(tuán)，發(fā)射在光譜的藍(lán)色區(qū)域。然而，如果羥基被烷基化或磷酸化，其熒光強(qiáng)烈淬滅，使其可用于磷酸酶和脂肪酶的高通量篩選。有趣的是，發(fā)現(xiàn)3-疊氮基衍生物也被高度猝滅，但是在銅存在下與炔反應(yīng)形成三唑時(shí)，熒光得以恢復(fù).1點(diǎn)擊的香豆素在λmax為480nm時(shí)發(fā)出。吸收在358納米。

HEX和TET是我們常用的兩種熒光素染料，用于標(biāo)記寡核苷酸。我們很高興提供6-HEX和6-TET疊氮化物用于點(diǎn)擊變換。